GS環(huán)保組織制備試劑處理組織免疫組化染色對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

GS環(huán)保組織制備試劑處理組織

免疫組化染色對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

病理技術(shù)流程中對組織的制備通常使用成本較低的甲醛與二甲苯，病理工作者長期承受甲醛、二甲苯等有毒有害試劑的侵害。哈爾濱格林公司研發(fā)的GS環(huán)保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）該產(chǎn)品以無醛、無苯等環(huán)保性得到認(rèn)可，近年來在全國許多二級、三級醫(yī)院得到應(yīng)用。在寧波病理中心的免疫組化染色技術(shù)流程中，該產(chǎn)品是否能滿足病理診斷的需要，需要在我中心的免疫組化染色操作技術(shù)流程條件下對其可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。

一、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計

實(shí)驗(yàn)分兩組，一組為實(shí)驗(yàn)組以哈爾濱格林公司GS系列環(huán)保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）進(jìn)行組織取材后組織制備，一組為對照組以常規(guī)10%福爾馬林和二甲苯進(jìn)行取材后組織制備。取寧波病理中心常規(guī)取材后具有代表性的新鮮標(biāo)本18個，每個標(biāo)本分別取兩塊，分別采用實(shí)驗(yàn)組和對照組試劑，分別置于ThermoPT420和Leica Prorie脫水機(jī)進(jìn)行固定、脫水、透明浸蠟。使用一致抗體檢驗(yàn)試劑進(jìn)行免疫組化染色。切片經(jīng)由高級職稱的病理醫(yī)師分別對比觀察，***終核定其病理診斷的可靠性和應(yīng)用性。

二、實(shí)驗(yàn)過程

（一）試劑選定

  1. 哈爾濱格林公司組織處理試劑

1.1  GSA-01（組織固定液）

1.2  GSA-02（組織脫水液I）

1.3  GSA-03（組織脫水液II）

1.4  GSA-04（組織透明液）

 2. 常規(guī)組織處理試劑

2.1  10%福爾馬林

2.2  75%酒精

2.3  95%酒精

2.4  無水酒精

2.5  二甲苯

 3. 抗體

3.1  ER

3.2  PR

3.3  HER-2

3.4  CK8

3.5  CK19

3.6  CK20

3.7  TTF-1

3.8  CD3

3.9  CD20

3.10  Ki-67

（二）標(biāo)本選定

寧波市臨床病理診斷中心手術(shù)標(biāo)本（常規(guī)取材后），每個標(biāo)本取1-1.5cm×0.5-1cm×0.3cm大小2塊，分別用于實(shí)驗(yàn)組和對照組。

組織類型包括：

1.  子宮內(nèi)膜與肌層×3

2.  肺組織×3

3.  扁桃體×3

4.  乳腺導(dǎo)管內(nèi)原位癌×1

5.  乳腺纖維腺瘤×2

6.  甲狀腺×3

7.  胃癌×1

8.  胃壁組織×2

9.  結(jié)腸×3

10. 肝組織×3

（三）實(shí)驗(yàn)方法

  1. 實(shí)驗(yàn)組用ThermoPT420脫水機(jī)進(jìn)行脫水機(jī)內(nèi)固定、脫水，透明及浸蠟，具體程序：

GSA-01   2h

75%酒精 30min

75%酒精 30min

80%酒精  1h

GSA-02   40min

GSA-02   1h

GSA-03   40min

GSA-03   1h

GSA-04   1h

GSA-04   1.5h

石蠟    1h

石蠟    1h

石蠟    1h

石蠟    1h

  2. 對照組用LeicaPlorie脫水機(jī)進(jìn)行脫水機(jī)內(nèi)固定、脫水、透明及浸蠟，具體程序：

10%福爾馬林   2h

75%酒精  30min

75%酒精  30min

85%酒精  1h

95%酒精  40min

95%酒精  1h

無水酒精  40min

無水酒精  1h

二甲苯    1h

二甲苯    1h

石蠟      1h

石蠟      1h

石蠟      2h

  3. 免疫組化染色程序：

對照組及實(shí)驗(yàn)組ER、PR、HER-2、CK20、CD3、CD20、Ki-67的切片均按Roch VENTANA免疫組化儀標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化程序進(jìn)行染色并封片。

對照組及實(shí)驗(yàn)組CK8、CK19的切片均按DOKO免疫組化儀標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化程序進(jìn)行染色并封片。

  4. 切片判讀

由3名具有高級職稱的病理醫(yī)師分別對比觀察切片，并記錄。

（四）實(shí)驗(yàn)對比結(jié)果

經(jīng)顯微鏡下對比實(shí)驗(yàn)組與對照組發(fā)現(xiàn)：1）兩組均背景干凈，陽性部位準(zhǔn)確；2）乳腺組織及子宮內(nèi)膜ER、PR 、Ki-67檢測中，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核表達(dá)呈棕色，對照組陽性細(xì)胞核呈棕黑色，但陽性表達(dá)的范圍與陽性率一致；3）其余各項(xiàng)指標(biāo)，兩組間表達(dá)范圍及染色程度均一致。

三、實(shí)驗(yàn)對比結(jié)論

實(shí)驗(yàn)組與對照組在常用免疫組化染色對比研究中一致性高，無顯著性差異，均達(dá)到診斷要求。表明經(jīng)哈爾濱格林公司組織處理試劑固定脫水透明的標(biāo)本與常規(guī)試劑固定脫水透明的標(biāo)本在免疫組化染色中能滿足病理診斷的需要。

                                                                                                                                     2014.10.6

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