GS環(huán)保組織制備試劑處理組織HER-2熒光原位雜交檢測(cè)（FISH）對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

GS環(huán)保組織制備試劑處理組織

HER-2熒光原位雜交檢測(cè)（FISH）對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

病理技術(shù)流程中對(duì)組織的制備通常使用成本較低的甲醛與二甲苯，使得病理工作者長期承受甲醛、二甲苯等有毒有害試劑的侵害。哈爾濱格林公司研發(fā)的GS環(huán)保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）該產(chǎn)品以無醛、無苯等環(huán)保性得到認(rèn)可，近年來在全國許多二級(jí)、三級(jí)醫(yī)院得到應(yīng)用。在寧波病理中心的免疫組化染色技術(shù)流程中，該產(chǎn)品是否能滿足病理診斷的需要，需要在我中心的免疫組化染色操作技術(shù)流程條件下對(duì)其可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。

一、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)分兩組，一組為實(shí)驗(yàn)組以哈爾濱格林公司GS系列環(huán)保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）進(jìn)行組織取材后組織制備，一組為對(duì)照組以常規(guī)10%福爾馬林和二甲苯進(jìn)行取材后組織制備。取寧波病理中心常規(guī)取材后乳腺標(biāo)本3個(gè)，每個(gè)標(biāo)本分別取兩塊，分別采用實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組試劑，分別置于ThermoPT420和Leica Prorie脫水機(jī)進(jìn)行固定、脫水、透明浸蠟。使用HER-2熒光原位雜交檢驗(yàn)試劑進(jìn)行FISH檢測(cè)。切片經(jīng)1名負(fù)責(zé)分子病理檢測(cè)的高級(jí)職稱的病理醫(yī)師及1名高級(jí)職稱技師進(jìn)行對(duì)比觀察，***終核定其病理診斷的可靠性和應(yīng)用性。

二、實(shí)驗(yàn)過程

（一）試劑選定

  1. 哈爾濱格林公司組織處理試劑

   1.1  GSA-01（組織固定液）

   1.2  GSA-02（組織脫水液I）

   1.3  GSA-03（組織脫水液II）

   1.4  GSA-04（組織透明液）

  2. 常規(guī)組織處理試劑

  2.1  10%中******爾馬林

  2.2  75%酒精

  2.3  95%酒精

  2.4  無水酒精

  2.5  二甲苯

 3. 探針

HER-2探針為雅培生物科技公司產(chǎn)品。

（二）標(biāo)本選定

寧波市臨床病理診斷中心手術(shù)標(biāo)本（常規(guī)取材后），每個(gè)標(biāo)本取1-1.5cm×0.5-1cm×0.3cm大小2塊，分別用于實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。

組織類型包括：乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌及浸潤性癌×3

（三）實(shí)驗(yàn)方法

  1. 實(shí)驗(yàn)組用ThermoPT420脫水機(jī)進(jìn)行脫水機(jī)內(nèi)固定、脫水，透明及浸蠟，具體程序：

GSA-01   2h

75%酒精 30min

75%酒精 30min

80%酒精  1h

GSA-02   40min

GSA-02   1h

GSA-03   40min

GSA-03   1h

GSA-04   1h

GSA-04   1.5h

石蠟    1h

石蠟    1h

石蠟    1h

石蠟    1h

  2. 對(duì)照組用LeicaPlorie脫水機(jī)進(jìn)行脫水機(jī)內(nèi)固定、脫水、透明及浸蠟，具體程序：

10%中******爾馬林   2h

75%酒精  30min

75%酒精  30min

85%酒精  1h

95%酒精  40min

95%酒精  1h

無水酒精  40min

無水酒精  1h

二甲苯    1h

二甲苯    1h

石蠟      1h

石蠟      1h

石蠟      2h

 3. 熒光原位雜交檢測(cè)程序：

對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組的切片均按雅培生物科技公司標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化熒光原位雜交程序進(jìn)行制片。

 4. 切片判讀

由負(fù)責(zé)分子病理檢測(cè)的高級(jí)職稱的病理醫(yī)師及技術(shù)員對(duì)比觀察切片，并記錄。

（四）實(shí)驗(yàn)對(duì)比結(jié)果

經(jīng)熒光顯微鏡下對(duì)比實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組發(fā)現(xiàn)：1）兩組均背景干凈，非特異性熒光背景不明顯； 2）兩組的HER-2紅色熒光信號(hào)及CEN-17綠色熒光信號(hào)均清晰，細(xì)胞核DAPI藍(lán)色熒光清晰并結(jié)構(gòu)良好；3）兩組的HER-2擴(kuò)增范圍信號(hào)統(tǒng)計(jì)后結(jié)果一致。

三、實(shí)驗(yàn)對(duì)比結(jié)論

實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在常用免疫組化染色對(duì)比研究中一致性高，無顯著性差異，均達(dá)到診斷要求。表明經(jīng)哈爾濱格林公司組織處理試劑固定脫水透明的標(biāo)本與常規(guī)試劑固定脫水透明的標(biāo)本在HER-2熒光原位雜交檢測(cè)中表達(dá)能滿足HER-2 FISH檢測(cè)的需要。

                                                                                                                                2014.10.6

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