GS無醛固定液在病理技術(shù)中的應(yīng)用價值

GS無醛固定液在病理技術(shù)中的應(yīng)用價值

聶貴軍　　

吉林省敦化市中醫(yī)院病理科

　　摘自：2014年第6期《醫(yī)藥前沿》

組織固定是病理技術(shù)工作的關(guān)鍵步驟，直接決定分子病理檢測和常規(guī)染色效果項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以前我們的病理科普遍都一直使用4%中性甲醛作為常規(guī)組織固定液，然而，我們都知道甲醛是一種具有強(qiáng)烈刺激性的揮發(fā)性液體，不僅污染環(huán)境，而且對我們?nèi)梭w的健康存在著很大的危害。因此我們也一直探尋者能夠找到一種固定液能夠替代甲醛固定液，并且在病理技術(shù)上比甲醛固定液的效果更好。哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開發(fā)有限公司研制出一種GS無醛固定液。該種無醛固定液是一種新型的組織固定液，因其不含甲醛，對人體無傷害、環(huán)境無污染，是病理技術(shù)工作中理想的固定液。本文就GS無醛固定液對不同組織的固定效果進(jìn)行分析，以驗(yàn)證其取代甲醛的可行性。
1. 資料和方法
 1.1一般資料 

隨機(jī)選取我院腫瘤手術(shù)室送檢的新鮮標(biāo)本6例，其中包括1例結(jié)腸癌患者，2例乳腺癌患者，2例淋巴瘤患者以及1例肝癌患者。我院使用的是由哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開發(fā)有限公司研發(fā)的GS無醛固定液?？贵w包括:PR、ER及 HER2(Roche公司)，CK18、CD20、CDX2、LCA、CD79a及由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供的bcl-2，HER2探針和Vvsis原位雜交試劑盒。
 1.2 方法
　　1.2.1 檢測方法分別切取腫瘤組織及瘤旁正常組織各2份，將其切成2cm×1cm×0.32cm大小的組織塊，放入包埋盒中，分別用無醛固定液（實(shí)驗(yàn)組）和4%中性甲醛固定液（對照組）固定50d，后進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋，其中環(huán)保型無醛固定液固定的組織用生物組織標(biāo)本制備套液中的生物組織標(biāo)本制備脫水液、生物組織標(biāo)本制備無苯透明液、生物組織標(biāo)本制備脫水液進(jìn)行脫水和透明。待所有標(biāo)本制備完成之后，統(tǒng)一切片進(jìn)行免疫組化染色，兩組均0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)5min?！?span>

1.2.2 免疫組化檢測 乳腺浸潤性都導(dǎo)管癌進(jìn)行PR和ER檢測；結(jié)腸腺癌進(jìn)行CK20和CEA檢測；肝腺癌進(jìn)行Her-2和CK8/18 檢測；淋巴瘤癌進(jìn)行CK5/6檢測；正常淋巴結(jié)進(jìn)行LCA和CD20檢測。反應(yīng)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參照許良中等建議，采取單盲法由2位初級病理醫(yī)師初步比較，***后由2位高級職稱病理醫(yī)師審核，

 1.3 統(tǒng)計(jì)方法 

將筆者在實(shí)驗(yàn)過程中獲得的數(shù)據(jù)輸入spss16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中進(jìn)行處理。其中計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。若檢驗(yàn)結(jié)果p<0.05，說明兩種不同的病例技術(shù)之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2. 結(jié)果
　　在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，無醛固定液固定的6例標(biāo)本，在切片中感覺切片厚薄均勻，組織塊軟硬適中，連續(xù)性比有醛固定液好。常規(guī)HE染色效果良好，細(xì)胞核漿相對于甲醛固定液其形態(tài)清晰完整，對比明顯。結(jié)腸癌病例(CK18、CDX2和LCA)、乳腺癌病例(ER、PR和HER2)、淋巴瘤病例以及肝癌病例行免疫組化染色。染色結(jié)果顯示無醛固定液固定的標(biāo)本組織細(xì)胞要比有醛組織液固定的標(biāo)本組織抗原性保存要好，陽性結(jié)果定位準(zhǔn)確，背景較為清晰。淋巴瘤病例均行FISH檢測HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)，檢測結(jié)果顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)完整排列緊密，紅色和綠色熒光信號較好。
　　表1  比較兩組標(biāo)本中經(jīng)1、5、10、15、20 d 染色較好的結(jié)果比較（例，%）分組 n 1～20d 20～50d >50   
　　無醛固定液固定法 6 3 6 6
　　有醛固定液固定法 6 3 4 5
　　P值 - >0.05 <0.05 <0.05
3. 討論
　　隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，學(xué)科之間相互滲透和影響，很多新的病理儀器和技術(shù)不斷涌現(xiàn)，我國病理技術(shù)有著明顯的變化，大量新方法、新技術(shù)、新儀器的應(yīng)用極大提高了病理技術(shù)水平，使我們對病理的認(rèn)識更加透徹。
　　根據(jù)不同固定液會對組織的穿透能力不同，會使細(xì)胞內(nèi)的低分子質(zhì)量物質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂類、黏多糖和核酸物質(zhì)的丟失，而良好的固定液可以避免這一情況的出現(xiàn)增大伸縮性和彈性度、使組織細(xì)胞的抗原性得到有例的保存。在過去一段時間甲醛一直是用于固定組織的標(biāo)準(zhǔn)固定液。甲醛固定液具有能長期保存組織，價格低廉，能進(jìn)行各種特殊染色，保存的組織形態(tài)良好，進(jìn)行抗原修復(fù)后的免疫組化染色結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)臨床上多用于其進(jìn)行固定。但隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步和科學(xué)的發(fā)展我們發(fā)現(xiàn)了甲醛固定液也有缺點(diǎn)，包括會形成甲醛色素，與含鐵血黃素相混淆，存放過久可聚合形成三聚甲醛，會對固定的效果產(chǎn)生一定的影響；且免疫組化結(jié)果會因?yàn)殚L時間的固定而受到影響。長期接觸甲醛會引發(fā)慢性呼吸道疾病、過敏、甚至腫瘤的發(fā)生。在我國，無醛固定液尚未得到廣泛應(yīng)用，但在國外發(fā)達(dá)國家，已經(jīng)推廣應(yīng)用環(huán)保型的固定液取代甲醛固定液。

目前甲醛固定法在絕大部分病理科仍然應(yīng)用作為日常工作中的固定方法。但在保持組織形態(tài)學(xué)、保存抗原性及DNA/RNA等方面的性能經(jīng)研究顯示環(huán)保型無醛固定液不遜色于甲醛固定液，甚至在很多的醫(yī)療方面還要更優(yōu)于甲醛固定液。本研究結(jié)果顯示，固定時間在1～20d時，無醛固定液的免疫組化染色結(jié)果和有醛固定液的免疫組化染色結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（>0.05），但經(jīng)過50d的固定時間后，甲醛固定液組的免疫組化陽性結(jié)果明顯劣于環(huán)保型無醛固定液。另外經(jīng)我們研究發(fā)現(xiàn)無醛組固定1d的免疫組化結(jié)果與固定50d的免疫組化結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明用環(huán)保型無醛固定液長時間固定組織至50d或者更多時間，免疫組化染色結(jié)果不會受到任何影響或者影響甚微。而在甲醛組固定20d時，免疫組化結(jié)果與固定1d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（<0.05)，說明甲醛固定液不適宜長時間固定組織，否則會導(dǎo)致抗原丟失，使免疫組化染色結(jié)果受到一定程度的影響。
　　GS無醛固定液是一種與甲醛固定組織的時間相同而且無色、******、無異味、無刺激性的環(huán)保固定液。我們的研究結(jié)果顯示，GS無醛固定液病理科日常工作中與常規(guī)4%中性甲醛固定液在免疫組化染色、HE染色、熒光原位雜交等均有相同的效果，完全可以取代甲醛成為病理科常規(guī)固定液。

參考文獻(xiàn)
[1] 潘黎明.環(huán)保型無醛固定液與甲醛固定液對免疫組化染色的效果比較[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2013，25(5):583-584.
[2] 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)[J].中國癌癥雜志，1996，6(4):229-231.
[3] 周會芹，楊江揮，余琦，等.不同組織固定液對免疫組化結(jié)果的影響[J]. 診斷病理學(xué)雜志，2009，6(16):478.

下載地址：/uploadfile/file/20170811/20170811163545_63778.doc

添加時間：2016-04-13 點(diǎn)擊量：1503