HE-天青II雙染法在骨髓穿刺活檢石蠟切片染色中的應(yīng)用

HE-天青II雙染法在骨髓穿刺活檢石蠟切片染色中的應(yīng)用

王華 夏朝霞 施婧婧

寧波市臨床病理診斷中心 

[摘要] 目的：探索一種操作簡便，能夠更為清晰的顯示骨髓穿刺石蠟組織切片中不同發(fā)育階段的三系細(xì)胞的染色方法。方法：選取120例骨髓病理活檢石蠟包埋組織，分別行HE染色和天青II-HE染色,對骨髓切片中各系細(xì)胞染色的效果進(jìn)行判讀，比較和評(píng)價(jià)HE-天青II雙染法與常規(guī)HE染色在骨髓穿刺石蠟組織切片的染色效果。結(jié)果：天青II-HE染色法比HE染色更加清晰的顯示出骨髓穿刺石蠟組織切片中不同發(fā)育階段的紅系、粒系、巨核系骨髓細(xì)胞的胞漿嗜堿性。天青II-HE染色法可以顯示出HE染色不能顯示的嗜堿性粒細(xì)胞。結(jié)論： 在骨髓穿刺石蠟組織切片染色中，天青II-HE染色法操作簡便，可以作為骨髓活檢常規(guī)HE染色的補(bǔ)充，為骨髓活檢病理診斷提供更多技術(shù)手段。

[關(guān)鍵詞]骨髓穿刺，病理活檢，石蠟切片；HE染色；HE-天青II染色；

骨髓病理學(xué)診斷即骨髓活組織診斷（bone marrow biopsy,BMB），簡稱骨髓活檢，以病理組織切片為標(biāo)本，進(jìn)行的骨髓組織（造血組織和細(xì)胞）形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)和分析評(píng)估^【1】。優(yōu)良的骨髓穿刺活檢石蠟切片染色技術(shù)是骨髓活檢病理診斷的基礎(chǔ)，也是病理技術(shù)工作中的難點(diǎn)。傳統(tǒng)常規(guī)HE染色方法是骨髓穿刺活檢的基礎(chǔ)染色方法，但HE染色在顯示不同分化發(fā)育階段的紅系、粒系骨髓細(xì)胞胞漿的嗜堿性差異和嗜堿性粒細(xì)胞的嗜堿性顆粒等方面都不理想。探索一種新的染色方法，能有效的顯示不同種類及不同發(fā)育階段的骨髓細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)，將對骨髓穿刺活檢病理診斷的準(zhǔn)確性提供有效的幫助。

1 材料和方法

1.1 材料選擇寧波市臨床病理診斷中心骨髓穿刺活檢石蠟包埋標(biāo)本120例。

1.2主要儀器 ThermoMICROMHm325切片機(jī)。

1.3試劑 GS環(huán)保HE染色套裝，天青II染液。

2 方法

2.1 骨髓活檢組織前處理骨髓穿刺組織經(jīng)中性緩沖福爾馬林固定12小時(shí)骨髓脫鈣液脫鈣后，常規(guī)脫水、包埋。

2.2切片 骨髓穿刺活檢石蠟包埋組織切片厚度2μm，連續(xù)切片2張。

2.3 HE染色 采用GS環(huán)保HE染色套裝進(jìn)行手工染色。

2.4 HE-天青II染色 根據(jù)骨髓HE切片的情況選擇含三系骨髓細(xì)胞超過40%骨髓穿刺活檢組織切片進(jìn)行HE-天青II雙染。染色步驟：①GS環(huán)保脫蠟劑切片脫蠟至水，②蘇木素染色5min，③水洗1min,④0.1%鹽酸乙醇分化至細(xì)胞核清晰胞漿無明顯蘇木素非特異性染色，⑤飽和碳酸鋰水溶液返蘭3s，自來水洗5min，⑥天青II染液浸染5min，蒸餾水洗5min，⑦0.01%醇溶性伊紅浸染5min⑧梯度酒精脫水，⑨GS環(huán)保透明劑透明，⑩環(huán)保封片膠封片

3結(jié)果

骨髓穿刺組織HE切片120例，其中含三系骨髓細(xì)胞超過40%的病例78張進(jìn)行HE-天青II染色。HE-天青II染色切片中各系骨髓細(xì)胞形態(tài)完整，核膜核仁清晰，核漿對比清晰，不同發(fā)育階段的紅系、粒系、巨核系胞漿嗜堿性差異明顯，粒系細(xì)胞胞漿的嗜酸性顆粒、嗜堿顆粒清晰，對比明顯 （圖A、B）。78例HE-天青II染色切片中觀察到嗜堿性粒細(xì)胞的5例（6.4%）。相同病例對應(yīng)的HE染色各系骨髓細(xì)胞形態(tài)完整，核膜核仁清晰，核漿對比清晰，嗜酸性粒細(xì)胞胞漿顆粒清晰，但胞漿嗜堿性弱，不同發(fā)育階段的骨髓細(xì)胞胞漿嗜堿性差異不明顯。78例HE染色切片中觀察到嗜堿性粒細(xì)胞的0例（0%）。其中一例骨髓HE-天青II染色切片中局部顯示有較多嗜堿性粒細(xì)胞，在HE染色切片相同區(qū)域中未觀察到嗜堿性粒細(xì)胞的存在，與嗜堿性粒細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)相似的細(xì)胞胞漿顆粒顯示具有嗜酸性（圖C、D）。

4 討論

骨髓活檢石蠟包埋切片染色技術(shù)的質(zhì)量是準(zhǔn)確進(jìn)行骨髓病理診斷的基礎(chǔ)。骨髓細(xì)胞中的紅系、粒系、巨核系三系細(xì)胞越幼稚，胞質(zhì)染色越深（嗜堿），細(xì)胞越成熟，染色越淺淡（嗜酸）；以胞漿染色深淺判斷有核紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、和巨核細(xì)胞的成熟度^【2】。常規(guī)HE切片染色中紅系、粒系、巨核系不同發(fā)育階段的骨髓細(xì)胞胞漿嗜堿性差異小，不能區(qū)分嗜酸性顆粒與嗜堿性顆粒，造成骨髓病理診斷的困難。

 天青II染料系亞甲藍(lán)與天青I的等量混合物，而天青I主要由天青A、天青B的混合物，亞甲藍(lán)（C₁₆H₁₈ClN₃S·3H₂0），天青A(C₁₄H₁₄ClN₃S)、天青B（C₁₅H₁₆ClN₃S）三種染料均溶于水，水溶液中三種染料分子電離而帶正電，能夠與骨髓細(xì)胞胞漿中的嗜天青分子成分有特異的結(jié)合。不同發(fā)育階段的骨髓細(xì)胞胞漿中所含的嗜天青顆粒成分有明顯差異，天青II染料分子的對胞漿嗜堿性成分的結(jié)合使其呈現(xiàn)出不同程度的嗜堿性。使骨髓細(xì)胞中的不同發(fā)育階段的骨髓細(xì)胞更易于區(qū)分。天青II染料在水溶液中呈正電，染色過程中對組織與細(xì)胞中嗜伊紅的組織成分影響小，使用HE-天青II雙染法在HE染色的基礎(chǔ)上增加了天青II染液的染色特點(diǎn)，彌補(bǔ)了常規(guī)HE染色不能顯示的嗜天青成分，胞核紅藍(lán)對比更鮮明，處于不同發(fā)育階段的三系骨髓細(xì)胞胞漿嗜堿性有層次。HE-天青II雙染法操作簡便，是一種可以推廣的骨髓活檢石蠟組織切片染色新方法。 

參考文獻(xiàn)：

【1】盧興國.骨髓細(xì)胞學(xué)和病理學(xué).北京：科學(xué)出版社，2008:3-5.

【2】陳輝樹.骨髓病理學(xué).北京:人民軍醫(yī)出版社,2010:25-26

                                                圖A：病例一（HE-天青II染色）

                                                                 圖B：病例一（HE染色）

                                             圖C：病例二（HE-天青II染色）顯示嗜堿性粒細(xì)胞

   圖D：病例二（HE染色）在HE-天青II染色中胞漿嗜堿性顆粒在HE染色中顯示為嗜酸性

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