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病理論壇在線咨詢環(huán)保型GS組織制備試劑的應(yīng)用價(jià)值
環(huán)保型GS組織制備試劑的應(yīng)用價(jià)值
郝志偉 孫廷誼 曾憲旭 曹靜 宋一民
鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院病理科 河南省人民醫(yī)院病理科 鄭州大學(xué)******附屬醫(yī)院病理科
摘自：2014年10期《診斷病理學(xué)雜志》
環(huán)保型GS組織制備試劑套液是一種新型組織脫水液，因其不含甲醛、二甲苯等有害成分，是病理技術(shù)工作中理想的固定液、脫水液。本文就對(duì)不同組織的固定液效果進(jìn)行分析，以驗(yàn)證其在病理技術(shù)中的應(yīng)用價(jià)值。
1. 材料與方法
1.1 材料
隨機(jī)選取我院手術(shù)室送檢的新鮮標(biāo)本20例，其中乳腺癌8例、子宮內(nèi)膜癌5例、胃癌3例、結(jié)腸癌2例、淋巴瘤和肝癌各1例。
1.2 方法
1.2.1 組織制備
分別切取腫瘤組織及瘤旁正常組織各6 份，將其切成2 cm x1 cm X 0. 2 cm大小的組織塊，放入包埋盒中，分別放入環(huán)保型GS組織制備試劑套液中的無醛固定液（天醛組）和4%中性緩沖甲醛固定液（甲醛組）固定1、3、 7、15、30和60天后，對(duì)照組進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋，實(shí)驗(yàn)組用環(huán)保型GS組織制備試劑套液進(jìn)行脫水、透明、浸蠟和包埋。統(tǒng)一切片。
1.2.2 常規(guī)HE染色
兩組同時(shí)進(jìn)行HE染色，采取單盲法先由2位初級(jí)病理醫(yī)師初步比較，***后由2位高級(jí)職稱病理 醫(yī)師審核。
1.2.3 特殊染色
兩組同時(shí)對(duì)胃癌、結(jié)腸癌進(jìn)行PAS染色，對(duì)肝癌進(jìn)行Masson染色和網(wǎng)狀纖維染色，檢測(cè)程序同上。
1.2.4 免疫組化
兩組同時(shí)對(duì)乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌進(jìn)行PR 和ER檢測(cè)，對(duì)乳腺癌進(jìn)行HER~2檢測(cè)，對(duì)胃癌、結(jié)腸癌進(jìn)行 CK8、CK18、CDX2和CEA檢測(cè)，對(duì)肝癌進(jìn)行AFP、CK8和 CK18檢測(cè)，對(duì)淋巴瘤進(jìn)行LCA、CD20、CD79a和bcW檢測(cè)，檢測(cè)程序同上。
1.2.5 SISH銀染原位雜交檢測(cè)
兩組同時(shí)對(duì)乳腺癌進(jìn)行HER2/17號(hào)染色體DNA雙探針檢測(cè)，檢測(cè)程序同上。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)輸入SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中進(jìn)行處理。其中計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。
2. 結(jié)果
表1不同天數(shù)固定后兩種固定液免疫組化切片結(jié)果分析（天）
|
固定液 |
1( % ) |
3( %) |
7( %) |
15 (%) |
30 (%) |
60 (%) |
|
gs（n) |
20 |
20 |
20 |
20 |
19 |
19 |
|
|
( 100) |
( 100) |
( 100) |
( 100) |
(95) |
(95) |
|
甲醛（n) |
20 |
20 |
19 |
15 |
14 |
10 |
|
|
( 100) |
( 100) |
(95) |
(75) |
(70) |
(50) |
3. 討論
目前甲醛固定法在絕大部分病理科仍然作為日常工作中的固定方法。但在保持組織形態(tài)學(xué)、保存抗原性及DNA/ RNA等方面的性能，研究顯示，環(huán)保型無醛固定液不遜色固定液。本研究結(jié)果顯示，組織固定時(shí)間在1 ~7天時(shí)，無醛組和甲醛組的免疫組化染色結(jié)果差異不顯著（P > 0.05)，但經(jīng)過60天的固定后，甲醛組的免疫組化陽性結(jié)果明顯劣于無醛組。另外，我們還發(fā)現(xiàn)，無醛組固定1天與固定60天的免疫組化結(jié)果進(jìn)行比較，兩組差異不顯著，說明用 環(huán)保型無醛固定液固定組織至60天或者更長(zhǎng)，對(duì)免疫組化染色結(jié)果影響甚微。而甲醛組固定15天與固定1天染色效果差異顯著（P <0.05)，說明甲醛固定液不適宜長(zhǎng)時(shí)間固定組織，否則會(huì)導(dǎo)致抗原丟失，使免疫組化染色結(jié)果受到一定的影響。
無醛固定液與傳統(tǒng)4%中性緩沖甲醛固定液處理的切片效果基本相同，組織滲透能力強(qiáng)，固定均勻，保持良好的組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，有較強(qiáng)的固定、脫水、 脫脂兼顧硬化的作用，組織收縮小，無核固縮，有效地保護(hù)組織中的抗原和核酸不被破壞、降解，DNA/RNA保存效果好。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，陽性率和陽性強(qiáng)度與傳統(tǒng)組織制片法進(jìn)行免疫組化檢測(cè)的結(jié)果相一致，甚至更優(yōu)于傳統(tǒng)組織制片法的結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用環(huán)保型GS組織制備試劑套液進(jìn)行組織脫水透明與傳統(tǒng)的方法比較，處理的組織塊軟硬適中，不會(huì)產(chǎn)生組織脫水過度或脫水不夠的現(xiàn)象，不易造成組織過度硬化，尤其對(duì)脂肪組織及較堅(jiān)韌的組織處理效果較傳統(tǒng)制片方法更好。
環(huán)保型GS組織制備試劑套液是一種無色、******、無異味、無刺激性的環(huán)保新型組織脫水制備液，不含甲醛、二甲苯等有害成分，對(duì)人體無傷害、對(duì)環(huán)境無污染，為建立“綠色 驗(yàn)室”奠定了良好的基礎(chǔ)。采用環(huán)保型GS組織制備試劑制作的石蠟切片、HE染色、組織化學(xué)染色、免疫組化染色、分子病理檢測(cè)等完全可以替代傳統(tǒng)的以甲醛、二甲苯為主體制備的石蠟切片技術(shù)流程，在病理技術(shù)中的應(yīng)用價(jià)值比傳統(tǒng)組織 制備的效果要好，值得推廣應(yīng)用。下載地址：/uploadfile/file/20170811/20170811170904_29550.doc