GS液在胸腹水沉渣切片中的應(yīng)用

孫廷誼  李真  謝紅建  孔令非

河南省人民醫(yī)院病理科

摘自：2014年第07期《診斷病理學(xué)雜志》

胸腹水的細(xì)胞學(xué)檢查對疾病的臨床******有重要的指導(dǎo)作用。常規(guī)檢查方法是將胸腹水進(jìn)行離心后涂片再染色鏡檢，由于該方法存在涂片后細(xì)胞重疊、結(jié)構(gòu)不太清晰、陽性檢出率不高等缺點，因而現(xiàn)在常使用胸腹水沉渣石蠟包埋切片方法來提高胸腹水細(xì)胞學(xué)的陽性率。沉渣包埋常用甲醛做固定液，而甲醛為有毒、有害試劑，所以我們改用GS環(huán)保試劑來固定胸腹水沉渣，取得了較為理想的效果。

 1. 材料與方法

  1.1 材料

收集河南省人民醫(yī)院病理科2011~07—2013-12 間送檢的胸腹水標(biāo)本共196例，其中胸水136例，腹水 60例。

主要儀器和試劑：Leica染色封片一體機，Leica~Band- Max全自動免疫組化染色儀，GS系列環(huán)保試劑（哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開發(fā)有限公司）。免疫組化試劑AE1/AE3、CEA MC、vimentin和MaxVision~2及試劑盒均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

  1.2 方法

   1.2.1標(biāo)本處理

選取新鮮的胸腹水，每例標(biāo)本分成2組，混勻后每份抽取胸腹水約50 ml置于2個離心管中，2000 r/ min離心10 min，棄上清；在試管底部沉淀物中加入50%乙醇，邊加邊搖，使離心管底部沉淀物分散、溶解直至色變淺紅，這時再次2000 r/min離心5 min，去除上清液，一組加入4%中性甲醛固定，離心后靜置3 ~6h，棄甲醛液，將沉淀物 放入組織脫水盒后進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋制成蠟 塊，此為常規(guī)組。另一組加入GS無醛固定液進(jìn)行固定，離心后靜置3 ~6 h，棄固定液，將沉淀物放入組織脫水盒后進(jìn)行GS系列處理制成蠟塊，稱為GS組。

   1.2.2實驗方法

將常規(guī)組和GS組的蠟塊統(tǒng)一切片，切片厚3 pm， HE染色用普通載玻片制片，烤片3 min;免疫組化染色切片用防脫載玻片制片，65T：烤片60 min。每個蠟塊均標(biāo)記AE1/AE3、CEA、MC和vimentin共4種抗體。為了使免疫組化染色更具有可比性，同一病例的2組蠟塊放在一批，選用相同的染色條件，在同一臺染色機上進(jìn)行染色。用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。HE染色按常規(guī)進(jìn)行染色，免疫組化按試劑盒說明書進(jìn)行，分別用手工和全自動染色機操作。染色結(jié)果由2位資深病理醫(yī)師進(jìn)行判讀。

 2. 結(jié)果

  2.1 HE染色

2組切片染色后薄厚比較均勻，著色效果良好，細(xì)胞形態(tài)比較完整，組織結(jié)構(gòu)顯示也較清晰，色彩比較鮮艷，核漿對比也比較分明，染色結(jié)果比較二者并無顯著差異。

  2.2免疫組化染色

2組切片經(jīng)手工和全自動染色機兩種 方式染色后，均未發(fā)現(xiàn)脫片現(xiàn)象，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，陽性定 位準(zhǔn)確，背景比較清晰，非特異性著色少，陽性對照和陰性對 照表達(dá)均正常，兩種免疫組化染色的結(jié)果未見明顯差異。

 3. 討論

胸腹水沉渣石蠟包埋切片的優(yōu)點是能收集到較多的有核細(xì)胞，使得切片上的細(xì)胞相對比較集中，而且細(xì)胞結(jié)構(gòu)也比較清晰，大大提高了胸腹水細(xì)胞的陽性檢出率。胸腹水沉渣石蠟包埋的蠟塊可以和組織一樣反復(fù)連續(xù)切片，避免了單一涂片取材的局限性，可以運用多種抗體進(jìn)行免疫組化標(biāo)記，以滿足診斷的需要，而且染色時不容易出現(xiàn)掉片現(xiàn)象，陽性定位準(zhǔn)確可靠，非特異性著色少，背景清晰，增加了脫落細(xì)胞的診斷價值。

GS環(huán)保試劑不含二甲苯、甲醛等有毒、有害物質(zhì)，具有較強的固定、脫水及脫脂作用，不但對組織滲透性強，縮短了脫水時間，而且還能保持良好的組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，不會出現(xiàn)細(xì)胞空泡和核固縮現(xiàn)象，同時還能保護(hù)完整的細(xì)胞膜，能充分保護(hù)組織中的核酸和抗原不被降解、擴(kuò)散或破壞，對RNA和DNA保存較理想，也有利于顯示出細(xì)胞的亞結(jié)構(gòu)。本實驗顯示，用GS環(huán)保試劑固定處理胸腹水沉渣，石蠟包埋切片的HE染色和免疫組化染色均取得了理想的效果，完全可以替代甲醛應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)的檢查。

參考文獻(xiàn)

[1] 付海洋，王成勤，趙潔，等.快速石蠟法在胸腹水細(xì)胞蠟塊制作中應(yīng)用[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2012， 28 (7) :820 -821.

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[3] 董建強，王德田.格林標(biāo)本——新一代環(huán)保型病理組織標(biāo)本固定脫水透明試劑試用報告[C].2011年全國病理技術(shù)新進(jìn)展研討會論文匯編