對(duì)照檢測(cè)GS試劑對(duì)組織抗原的影響

對(duì)照檢測(cè)GS試劑對(duì)組織抗原的影響

孫廷誼  李真  謝紅建  孔令非

河南省人民醫(yī)院病理科

摘自：2014年05期《診斷病理學(xué)雜志》

目前，經(jīng)過(guò)GS試劑處理制作的蠟塊在放置較長(zhǎng)時(shí)間后 對(duì)組織抗原的保存效果的報(bào)道卻較少。因此，我們通過(guò)免疫組化染色和分子學(xué)檢測(cè)，對(duì)60例標(biāo)本組織中21種抗體進(jìn)行了回顧性檢測(cè)，測(cè)試經(jīng)GS試劑處理制作的蠟塊經(jīng)過(guò)2年放置后組織抗原的保存情況。

1.材料與方法

 1.1材料

選取河南省人民醫(yī)院病理科2011-J7—12間手術(shù)切除標(biāo)本60例，其中乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、間質(zhì)瘤、胃癌、前列腺、腦組織、淋巴瘤、扁桃體各6例，所有腫瘤均經(jīng)病理證實(shí)，患者術(shù)前未進(jìn)行化、放療。將每例標(biāo)本的同一部位先切取一塊較大組織，再將這一塊較大組織塊從中間切開(kāi)，一塊制作為常規(guī)蠟塊組，另一塊制作為GS蠟塊組。 兩組共120個(gè)蠟塊在本次實(shí)驗(yàn)之前均經(jīng)過(guò)2年的放置。

免疫組化抗體 ER、PR、HER4、Ki~67、AE1/AE3、CD117、 DOG4、GFAP、p53、NF 為 Dako 公司產(chǎn)品，CA125、CA19~9、 p16、actin、p63、PSA、CD34、LCA、CD3、CD20、CD10 和 MaxVision~2試劑盒均購(gòu)置自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。GS環(huán)保試劑全部購(gòu)于哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。HER-基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒購(gòu)自于北京市金菩嘉醫(yī)療科技公司。

 1.2 方法

  1.2.1 相互對(duì)照

所有蠟塊進(jìn)行切片時(shí)，把原來(lái)取材時(shí)同部位一分為二的兩塊組織重新黏貼在同一張載玻片上，每張玻片近標(biāo)簽端黏貼常規(guī)蠟塊組的切片，遠(yuǎn)標(biāo)簽端黏貼GS蠟塊組的切片，兩個(gè)組織片的間距>0. 3 cm，這樣使原來(lái)同一部位被2個(gè)組的組織切片在同一載玻片上相互對(duì)照。再將傳統(tǒng)HE染色和GS染液HE染色設(shè)為對(duì)照組，將免疫組化手工染色和全自動(dòng)染色也設(shè)為對(duì)照組。所有切片厚3 μm， HE染色切片用普通載玻片制片，免疫組化染色的切片用防脫載玻片制片。

  1.2.2  實(shí)驗(yàn)對(duì)照

乳腺癌組織檢ER、PR和c-ab~B2；胃 癌檢測(cè)AE1/AE3和actin；前列腺檢測(cè)p63和PSA；腦組織檢測(cè)GFAP和NF；扁桃體檢測(cè)CD3和CD10；結(jié)腸癌組織檢測(cè) CA19~9和p53；卵巢癌組織檢測(cè)CA125和CD34；宮頸癌組織檢測(cè)p16和Ki-67；間質(zhì)瘤組織檢測(cè)CD117和DOG - 1；淋巴瘤組織檢測(cè)CD20和LCA。21種抗體均另設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照，用已知陽(yáng)性的切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一 抗作為陰性對(duì)照。

FISH檢測(cè)則選擇6例乳腺癌中2例HER4染色為3 + 的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，同樣每張載玻片上也黏貼常規(guī)蠟塊組和 GS蠟塊組兩種HER~2染色為3 +的切片。操作步驟嚴(yán)格依據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

 1.3結(jié)果

判定所有染色均經(jīng)2位資深病理醫(yī)師采用雙盲法判讀。浸潤(rùn)性乳腺癌細(xì)胞核內(nèi)橘紅色HER4基因的熒光 信號(hào)與17號(hào)染色體的綠色熒光信號(hào)的比值>2.2時(shí)為 HER4基因擴(kuò)增，<1.8為無(wú)擴(kuò)增，1.8 ~2.2需要再計(jì)數(shù)30個(gè)細(xì)胞核中的信號(hào)情況。

 

2. 結(jié)果

 2.1 HE

同一載玻片上2種切片相比無(wú)明顯差異，傳統(tǒng)和GS染液染色結(jié)果也無(wú)明顯差異，染色后細(xì)胞形態(tài)比較完整，組織結(jié)構(gòu)顯示得比較清晰，色彩較鮮艷，核漿對(duì)比比較分明，染色效果均顯示良好。

 2.2免疫組化

同一載玻片上2種切片染色結(jié)果無(wú)明顯差 異。手工與全自動(dòng)染色切片結(jié)果也無(wú)明顯差異。免疫組化染色后組織結(jié)構(gòu)較完整、無(wú)脫片、著色均勻，陽(yáng)性定位準(zhǔn)確、 無(wú)非特異性著色、背景較清晰、容易判讀。陰性對(duì)照切片無(wú)著色，細(xì)胞核藍(lán)染，背景也清晰。

 2.3 FISH

2例浸潤(rùn)性乳腺癌HER2 (3+)的標(biāo)本均能看到呈簇狀分布的紅色信號(hào)，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)完整，紅色和綠色的熒光信號(hào)較好，對(duì)比清晰。

3. 討論

GS試劑對(duì)組織的滲透性較強(qiáng)，可以使脫水時(shí)間縮短，具有較強(qiáng)的固定、脫水、脫脂作用，處理后組織的軟硬度較適 中，不容易使組織收縮過(guò)度，也不容易出現(xiàn)細(xì)胞空泡現(xiàn)象與核固縮現(xiàn)象，可以使組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)保持良好，細(xì)胞膜的完 整性也得到相應(yīng)保護(hù)，保護(hù)了組織中的核酸和抗原，所以對(duì)組織中的DNA和RNA保存效果較好。

本次實(shí)驗(yàn)在同一載玻片上均黏附原來(lái)同一部位同一組織被切開(kāi)分別處理的常規(guī)蠟塊組和GS蠟塊組的組織切片 作為相互對(duì)照進(jìn)行染色，充分保證了兩組的組織切片是在同一環(huán)境條件下進(jìn)行的各種染色，使得結(jié)果更加真實(shí)、可靠。 結(jié)果顯示，經(jīng)GS試劑處理后制作的蠟塊經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間（>2 年）放置后組織抗原依然保存較好。
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