回顧性測試GS試劑處理的蠟塊組織抗原的保存效果

回顧性測試GS試劑處理的蠟塊組織抗原的保存效果

孫廷誼  謝紅建  孔令非

 河南省人民醫(yī)院病理科

摘自：2013年05期《診斷病理學(xué)雜志》

GS系列環(huán)保型病理試劑是一套國內(nèi)研制的甲醛和二甲苯替代試劑，它可以替代傳統(tǒng)的以甲醛二甲苯為主體的石蠟切片技術(shù)流程，減少室內(nèi)有毒有害氣體的污染和毒害作用，同時杜絕大量排放此類毒害化學(xué)物質(zhì)對生活環(huán)境的污染，隨著GS試劑使用的推廣，GS試劑處理制作的蠟塊放置后組織抗原的保存狀況也應(yīng)該引起大家的重視。

    1.材料與方法

      1.1 材料

選取河南省人民醫(yī)院病理科2011-7月一 12 月，手術(shù)切除標(biāo)本80例，其中乳腺癌20例，胃癌20例，前列腺、腦組織、淋巴瘤、扁桃體組織各10例，乳腺癌、胃癌均經(jīng) 病理證實(shí)，患者術(shù)前未進(jìn)行放療或化療。取材時相同部位取2份。常規(guī)蠟塊組:1份常規(guī)固定、脫水透明制作蠟塊；GS蠟 塊組:1份經(jīng)GS無醛固定液固定、GS系列脫水透明套液試劑制作蠟塊，2組蠟塊均經(jīng)過1年以上時間的放置。

主要儀器和試劑Leica染-封一體機(jī)，Leica~Band全自 動免疫組化染色儀，Leica 機(jī)用 Bond Polymer Refine Detection 染色試劑盒。免疫組化抗體ER、PR、Ki~67、AE1/AE3、 GFAP、NF 為 DAKO 公司產(chǎn)品，actin、P63、PSA、CD34、LCA、 CD3、CD20、CD10、vimentin (MAB—)178)和 Maxvision 試劑盒均購置于福州邁新生物技術(shù)公司。GS系列試劑購置于哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開發(fā)有限公司。

     1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)  對照常規(guī)蠟塊組和GS蠟塊組所有蠟塊統(tǒng)一進(jìn)行切片，每個蠟塊連續(xù)切片用防脫載玻片制片厚3|xm，65T：烤片 60min。乳腺癌檢測 ER、PR、Ki~67 和 vimentin，胃癌檢測AE1/AE3、actin和vimentin，前列腺檢測p63、PSA和 vimentin，腦組織檢測GFAP、NF和vimentin，淋巴瘤檢測 CD34、LCA 和 vimentin，扁桃體檢測 CD3、CD20、CD10 和 vimentin，用已知陽性切片作陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

        1.2.2傳統(tǒng)HE染色  略。

1.2.3 GS環(huán)保型染液HE染色  GS套染試劑染色，無苯封片膠封片。

1.2.4 免疫組化手工染色  每種抗體采用相應(yīng)抗原修復(fù)方法，一抗室溫醇育1h，Maxvision二抗室溫醇育15min，DAB 顯色，復(fù)染、脫水、透明，中性樹膠封片。

1.2.5全自動免疫組化染色  嚴(yán)格按Leica~Band全自動免疫組化染色儀SOP文件操作。

   2. 結(jié)果

      2.1 HE染色

GS蠟塊組與常規(guī)蠟塊組HE染色效果良好，細(xì)胞形態(tài)完整，組織結(jié)構(gòu)顯示清晰，色彩鮮艷，核質(zhì)對比分明，染色結(jié)果相2組無明顯差異。

      2.2 免疫組化染色

GS蠟塊組與常規(guī)蠟塊組兩組切片經(jīng)手工染色與全自動染色后切片組織結(jié)構(gòu)完整、無脫片現(xiàn)象、著色均勻、陽性結(jié)果定位準(zhǔn)確、無非特異性著色、背景清晰、 易判斷，兩組免疫組化染色結(jié)果未見明顯差異。陰性對照切片無DAB著色，細(xì)胞核藍(lán)染，背景清晰。每個蠟塊均做檢測的vimentin胞質(zhì)著色，定位準(zhǔn)確，背景清晰，兩組免疫組化染色結(jié)果也未見明顯差異。

   3. 討論

GS試劑不含甲醛、二甲苯等有毒有害物質(zhì)，運(yùn)用界面化學(xué)及電荷占位原理，對組織標(biāo)本進(jìn)行脫水、透明和浸蠟，而且有較強(qiáng)的固定、脫水、脫脂兼硬化作用，不易導(dǎo)致組織過度收 縮，無細(xì)胞空泡與核固縮現(xiàn)象產(chǎn)生，處理的組織軟硬適中，尤 其對脂肪、淋巴組織等的處理效果較好，處理較堅(jiān)韌的子宮肌瘤、皮膚組織也能使其具有較好的柔韌度而有利于切片。GS試劑對組織滲透性強(qiáng)，能縮短脫水時間，能保持良好的組 織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，同時能保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，能******限度地保護(hù)組織中的抗原和核酸不被破壞、降解或擴(kuò)散，對DNA和 RNA保存較佳，也有利于顯示細(xì)胞的亞結(jié)構(gòu)。以vimentin 作為對照，是為了觀察組織經(jīng)甲醛固定后預(yù)期抗原表達(dá)的敏感性，按固定后抗原損傷的程度來進(jìn)行分析。vimentin幾乎 在任何組織中都有表達(dá)，在與上皮組織相連接的間質(zhì)中存在著大量的血管vimentin可陽性表達(dá)，如果在同一張切片的間 質(zhì)中出現(xiàn)vimentin染色微弱或部分區(qū)域變?nèi)醯那闆r，表明是不當(dāng)?shù)奶幚韺?dǎo)致抗原破壞。本實(shí)驗(yàn)vimentin胞質(zhì)著色，定位 準(zhǔn)確、背景清晰，結(jié)果可靠，證明標(biāo)本組織的細(xì)胞抗原性保存良好。GS蠟塊組與常規(guī)蠟塊組切片經(jīng)免疫組化后組織結(jié)構(gòu)完整，無脫片現(xiàn)象，著色均勻，陽性結(jié)果定位準(zhǔn)確，無非特異性著色，兩組免疫組化染色結(jié)果未見明顯差異。我們體會到 用GS無醛固定液固定、GS系列脫水透明套液試劑制作的組織蠟塊，在經(jīng)過相對較長一段時間放置后切片所做的手工和 全自動免疫組化染色均能取得滿意的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)：

[1]田玉旺，朱紅艷，李琳，等.GS環(huán)保試劑在病理制片中技術(shù) 工作中的應(yīng)用.2011年全國病理技術(shù)新進(jìn)展研討會論文匯 編，20113.25 -28.

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