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病理論壇在線(xiàn)咨詢(xún)環(huán)保型染色套液在常規(guī)病理組織切片染色中的應(yīng)用
環(huán)保型染色套液在常規(guī)病理組織切片染色中的應(yīng)用
田玉旺 朱紅艷 朱培雙 邢宜
北京軍區(qū)總醫(yī)院病理科
摘自：2013年10期《診斷病理學(xué)雜志》
在常規(guī)病理組織切片染色過(guò)程中，二甲苯、含汞蘇木精染液等作為病理常規(guī)試劑被大量應(yīng)用，這些試劑具有強(qiáng)烈的 刺激性和揮發(fā)性，不僅污染環(huán)境而且嚴(yán)重危害身體健康。尋找一種對(duì)人體******、無(wú)害且安全的替代品，已成為病理技術(shù)工作者的一種迫切愿望。我們將環(huán)保型染色套液應(yīng)用于常規(guī)病理組織切片染色過(guò)程中，收到了較好的效果。
1. 材料與方法
1.1 標(biāo)本
選取北京軍區(qū)總醫(yī)院病理科2011-01—2012-01 間臨床送檢的各種活體組織標(biāo)本200例，其中包括正常乳腺及乳腺癌、甲狀腺、胃黏膜、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌、淋巴結(jié)、 腎、脂肪、子宮肌瘤、食管及皮膚等組織。
1.2 試劑
環(huán)保型染色套液包括：脫蠟液、無(wú)汞蘇木精染液、分化液、返藍(lán)液、伊紅染色液、除浮染液、除水透明液和透明液（哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司研制生產(chǎn)）；傳統(tǒng)染色試劑包括：二甲苯、梯度乙醇、含汞蘇木精、1%鹽酸乙 醇、氨水和伊紅。
1.3 方法
組織經(jīng)常規(guī)4%中性甲醛固定，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片厚4 ~5 μm。 每種組織切片2張，一張采用傳統(tǒng)HE染色；另一張采用環(huán)保型染色套液進(jìn)行HE 染色，比較二者染色效果。傳統(tǒng)HE染色步驟:①切片經(jīng)二甲苯I、Ⅱ脫蠟各5min；②無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇各 2 min，自來(lái)水洗；③蘇木精染8 min，自來(lái)水洗；④1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘，自來(lái)水洗；⑤1%氨水返藍(lán)1 min，自來(lái)水洗； ⑥1%水溶性伊紅染1 min；70%乙醇、95%乙醇各10 s，無(wú) 水乙醇I、II各2 min，二甲苯I、II各2 min，中性樹(shù)膠封固。環(huán)保型染色套液HE染色步驟:①切片經(jīng)脫蠟液I 5 min，脫 蠟液I 5 min，自來(lái)水洗2 min；②無(wú)汞蘇木精染色液3 ~ 5 min，自來(lái)水洗10 s；③分化液2 ~3 s，自來(lái)水洗1 min；④藍(lán)化液1 min，自來(lái)水洗1 min；⑤伊紅染色液1 ~3 min，自來(lái)水洗3 s；⑥除浮染液3 s，瀝干殘余試劑；⑦除水透明液1 min，瀝干；⑧透明液3 min，無(wú)苯封片膠封固。
2. 結(jié)果
采用環(huán)保型染色套液進(jìn)行HE染色，染液滲透力強(qiáng)，染色速度快，組織結(jié)構(gòu)顯示清晰，色彩鮮艷，核漿對(duì)比分明；與傳統(tǒng)HE染色結(jié)果相比二者無(wú)明顯差異（圖1，2)。
圖1乳腺組織，環(huán)保型染色套液HE染色
3. 討論
在傳統(tǒng)HE染色過(guò)程中，二甲苯作為***常用的苯類(lèi)試劑被病理實(shí)驗(yàn)室大量使用，它極易揮發(fā)，是一種對(duì)人體具有較強(qiáng)毒害作用的有機(jī)化學(xué)試劑。其主要毒性是對(duì)************和植物神經(jīng)的麻醉及黏膜的刺激作用，主要通過(guò)呼吸道或經(jīng)皮膚吸收，長(zhǎng)期接觸有致癌作用。它除對(duì)操作者的健康構(gòu)成威脅外，如果將廢棄的試劑不經(jīng)專(zhuān)業(yè)處理直接傾倒入下水道，會(huì)造成周邊環(huán)境及城市水系的嚴(yán)重污染，而采用專(zhuān)業(yè)回收處
理會(huì)大大提高成本。
為了克服二甲苯存在的缺點(diǎn)，我科使用環(huán)保型病理切片染色套液進(jìn)行常規(guī)活檢切片HE染色，收到了理想的制片效 果。這些試劑均為非苯類(lèi)******型復(fù)合試劑，可以替代二甲苯對(duì)組織切片進(jìn)行脫蠟和染色脫水后的透明處理以及封固，徹底根除了二甲苯對(duì)人體的傷害及其對(duì)環(huán)境的污染。脫蠟劑使組織切片脫蠟徹底、速度快、不出現(xiàn)脫蠟不足的現(xiàn)象；透明
劑對(duì)組織滲透力強(qiáng)、作用溫和、切片透明度好，保證了切片的染色質(zhì)量。環(huán)保型染色套液中的蘇木精為無(wú)汞染液，對(duì)人體 ******無(wú)害，對(duì)組織親和力強(qiáng)，染色速度快，不易產(chǎn)生氣化膜而污染組織，切片長(zhǎng)期存放細(xì)胞核不易褪色，染液使用時(shí)間長(zhǎng)
并且不需自行配制，便于實(shí)驗(yàn)室對(duì)切片進(jìn)行質(zhì)量控制。鏡下組織切片色彩鮮艷，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，核漿對(duì)比分明，與傳統(tǒng) HE染色效果基本一致。
總之，新型環(huán)保型病理切片染色套液具有創(chuàng)新性和實(shí)用 性，染色效果穩(wěn)定可靠，完全可以替代傳統(tǒng)的有毒病理試劑，并且有利身體的健康，減少了環(huán)境污染，值得在病理實(shí)驗(yàn)室廣泛推廣使用。
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