GS無醛固定液在病理技術(shù)工作中的應(yīng)用

GS無醛固定液在病理技術(shù)工作中的應(yīng)用

     謝永強(qiáng)  郭蕾 劉秀云 鄭閃 沈貴華

     中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院病理科

摘自：2011年02期《診斷病理學(xué)雜志》

組織固定是病理技術(shù)工作的關(guān)鍵步驟，直接決定常規(guī)染色效果及分子病理檢測項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。多年以來，病理科一直使用10%中******爾馬林作為常規(guī)組織固定液。然而，福爾馬林是一種具有強(qiáng)烈刺激性的揮發(fā)性液體，不僅污染環(huán)境，而且危害人體健康。無醛固定液是一種新型的組織固定液，因其不含福爾馬林，對人體無傷害，環(huán)境無污染，應(yīng)能成為病理技術(shù)工作中理想的固定液。本文就一種新型的無醛固定液對不同組織的固定效果進(jìn)行如下評價(jià)，以驗(yàn)證其取代福爾馬林的可行性。

1. 材料與方法

 1.1 材料

隨機(jī)選擇中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院手術(shù)室送檢的新鮮標(biāo)本4例，包括乳腺癌2例，結(jié)腸癌1例，淋巴瘤1例。

 1.2 儀器和試劑

脫水機(jī)（Leica ASP 300型），切片機(jī)（Leica2235），Leica染-封一體機(jī)，Roche全自動免疫組化染色儀（VENTANA），原位雜交儀（美國ThermoBrite Abbott公司），熒光顯微鏡（OLYMPUS BX51）。無醛固定液（由哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開發(fā)有限公司研制并生產(chǎn)）。ER、PR及HER2(Roche公司)， CK18、CDX2、LCA、CD20、CD79a及Bcl-2為工作液（邁新公司），HER2探針Vysis原位雜交試劑盒（DAKO公司）。

 1.3 固定

分別擇取腫瘤及瘤旁正常組織，切成2.0cm×1.0cm×0.2cm大小的組織塊，裝入包埋盒中，放入無醛固定液中固定12h，常規(guī)脫水、包埋、切片^[1]。全自動染色機(jī)進(jìn)行HE染色。

 1.4 免疫組化染色

標(biāo)本經(jīng)無醛固定液固定后，石蠟包埋，3m連續(xù)切片。以全自動免疫組化染色儀行相應(yīng)標(biāo)本的免疫組織化學(xué)染色。

 1.5 FISH檢測

2例乳腺癌病例應(yīng)用Vysis HER2檢測試劑盒，參照試劑盒說明書推薦的步驟操作。

 

2. 結(jié)果

使用無醛固定液固定4例標(biāo)本，在切片中感覺組織塊軟硬適中，切片厚薄均勻，連續(xù)性好。常規(guī)HE染色效果良好，細(xì)胞形態(tài)完整，核漿對比清晰(圖1，2)。

乳腺癌病例行ER，PR，HER2免疫組化染色，結(jié)腸癌病例行CK18，CDX2，LCA免疫組化染色，淋巴瘤病例行CD20，CD79a，Bcl-2免疫組化染色。染色結(jié)果顯示無醛固定液固定的標(biāo)本組織細(xì)胞抗原性保存好，陽性結(jié)果定位準(zhǔn)確，背景清晰(圖3，4)。

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌病例均行FISH檢測HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)，檢測結(jié)果顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)比較完整，紅色和綠色熒光信號較好，對比清晰(圖5)。

3. 討論

組織固定是病理技術(shù)的基礎(chǔ)。組織固定的效果，不僅直接影響病理切片制作的質(zhì)量，還影響著免疫組化和分子病理的檢測結(jié)果。傳統(tǒng)的10%中******爾馬林固定液，對組織滲透能力強(qiáng)，固定均勻，組織收縮小，因此是現(xiàn)在病理科常規(guī)固定液。但其也有著明顯的缺點(diǎn)，包括①有刺激性氣味，個(gè)別人接觸可導(dǎo)致皮膚過敏；②存放過久可聚合成三聚甲醛，影響固定效果；③易形成甲醛色素，與含鐵血黃素相混淆；④不能固定肝糖原和尿酸；⑤長時(shí)間固定影響染色效果^[2]。但其******的缺點(diǎn)是對人體有著極強(qiáng)的危害性，病理科工作人員長期吸入能引起慢性中毒，同時(shí)它也是一種致癌物質(zhì)。因福爾馬林有如此明顯的缺點(diǎn)，長期以來用無醛固定液取代福爾馬林進(jìn)行組織固定是病理科技術(shù)革新的內(nèi)容之一。

無醛固定液是一種環(huán)保固定液，它******、無色、無異味、無刺激性，PH值中性，且與甲醛固定組織的時(shí)間相同，可以應(yīng)用于固定的組織標(biāo)本。我們的研究結(jié)果顯示無醛固定液與常規(guī)的10%中******爾馬林固定液在HE染色、免疫組化染色、熒光原位雜交等病理科日常工作中均有相似的效果，可以取代后者成為病理科常規(guī)固定液。

 

參考文獻(xiàn)

[1] 周庚寅．組織病理學(xué)技術(shù)[M]．北京:北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2000，1-2.

[2] 周會芹，楊江輝，余琦等．不同組織固定液對免疫組化結(jié)果的影響. 診斷病理學(xué)雜志，2009，6（16）：478. 

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